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《粮油检验 大豆水溶性蛋白含量的测定》国家编制说明
(一)工作简况
1 任务来源
根据国家粮食局2015年粮油标准制修订计划的要求,由南京财经大学等单位负责《粮油检验 大豆水溶性蛋白质含量的测定》(计划号制定工作。起草单位成立的标准起草组负责进行本标准的各项工作。
2制定本标准的意义
大豆富含脂肪和蛋白质,是重要的油料作物,因其含有30~50%的蛋白质,也是重要的植物蛋白资源,含有所有必需氨基酸,其加工功能,营养和风味特性在食品工业中发挥着重要作用,常用作来制作各种豆制品、酿造酱油、提取蛋白质及加工饲料。新收获大豆中所含蛋白质通常90%以上可溶于水,这部分蛋白称之为水溶性蛋白。只有能溶解的蛋白才能更好的被加工利用,所以大豆蛋白质的溶解性是豆制品加工和大豆蛋白生产最重要的特性。大豆水溶性蛋白主要由大豆球蛋白和大豆清蛋白组成,随着储存时间延长,大豆蛋白的水溶性降低,因此,我国将大豆水溶性蛋白含量作为是否适宜储存的重要判定指标。另外,GB/T19541-2017 《饲料原料 豆粕》标准中也将氢氧化钾蛋白质溶解度作为豆粕质量的一项主要质量指标进行了规定。为规范统一、提高分析检测效率,有必要制定大豆水溶性蛋白质含标准检验方法。
3标准主要工作过程
为了更好的完成标准任务,查阅了国内外相关资料。目前,蛋白质含量测定的主要方法有凯氏定氮法、光谱法、比色法和近红外等。而大豆水溶性蛋白质含量测定主要采用凯氏定氮法,涉及到的标准有GB/T 5511-1985附录A、NY/T 1205-2006、GB/T 31785-2015附录A和AOCS Officoal Method Ba 11-65,其中GB/T 31785-2015《大豆储存品质判定规则》中附录A给出的水溶性蛋白质测定方法完全等同于GB/T 5511-1985附录A。研究表明,水溶性蛋白的提取是大豆水溶性蛋白含量测定的关键,振荡方式、振荡频率、提取温度、样品细度等因素均能影响水溶性蛋白的提取。在比较现行的研究文献和相关标准基础上,确定了本方法标准制定方案和工作计划。
(二)标准的编制原则和标准的主要内容
1标准编制原则
本标准是根据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分:标准的结构与编写规则》、GB/T20001.4-2009《标准编写规则第4部分:化学分析方法》的规定进行编制的。
2确定国家标准主要内容
本标准的技术内容包括范围、规范性引用文件、原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算及精密度等。
3主要研究内容及试验结果
3.1标准研究的内容及原理
本标准规定了大豆中水溶性蛋白质含量测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算和精密度。
测定原理:用水提取大豆中的水溶性蛋白,含氮化合物在催化加热条件下被分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,加碱蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸的消耗量计算含氮量,再乘以换算系数,计算出大豆中水溶性蛋白的含量。
3.2 试验结果
以国产东北大豆为原料,通过单因素试验及正交试验的结果,结合参加起草单位验证数据,并综合考虑各因素在实际中的简便、可行性,确定了大豆水溶性蛋白提取的最佳提取条件:料液比 1∶40、提取时间 2 h、提取温度 30 ℃、离心转速 3000 r/min。
3.2.1 水溶性蛋白提取
取混合均匀的样品80g~100g,粉碎(一次通过CQ24筛的≥90%),称取粉碎试样1g(精确到0.001g)于50 mL离心管中,吸取40 mL蒸馏水于离心管中,摇混使样品均匀分散。在可控温往复式摇床上, 35 ℃±2℃温度下振荡2 h。取下离心管,以3000 r/min的速度离心10 min。
3.2.2 凯氏定氮法
消化:准确吸取离心管中的上清液10mL于250mL凯氏定氮瓶中,加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及12mL硫酸,充分混合。先水炎加热,后大火加热至消化完全,放冷后定容至100mL。
蒸馏吸收:连接好定氮蒸馏装置。取10.00mL试样处理液蒸馏吸收。
滴定 :以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定至浅灰红色。
3.2.3 自动凯氏定氮仪法
准确吸取上清液10mL于消化管中,于消化炉进行消化,消化完成后加入50mL水,再在自动凯氏定氮仪上进行蒸馏、滴定等。
根据滴定时,耗的硫酸标准滴定溶液体积、稀释位数、蛋白质换算系数等计算试样中水溶性蛋白质含量。
(三)本标准主要内容的论据
定氮法测定蛋白质含量方法业已成熟,并已列为ISO标准方法和世界各国的国家标准方法。在大豆水溶性蛋白质含量测定过程中,主要的影响是水溶性蛋白质的提取分离。本标准起草过程中主要对提取条件进行方法学研究和验证。
1 测定方法研究
1.1 振荡提取时间对大豆水溶性蛋白质含量的影响
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