2017年国际生物奥林匹亚国手选拔营实作试题第1试场实作B.PDF

考生編號 分數 2017 年國際生物奧林匹亞國手選拔營實作試題 第 1試場 實作 B 第 II部分 限制酶切位檢測建構質體組成 實驗所需要的器材及藥品，都已放在桌上，請按照下面的清單清點。 若有缺少請舉手告訴評審老師。實驗完畢後，請將用過的器材清洗乾 淨並放置整齊。 實驗器材： 器 材 類 數量 藥品及材料類 數量 (µl) 微量分注器 p20 1 支 無菌水 1 管 (100) p20 微量分注器吸管尖 30 支 微量離心管 4 支 以下藥品置於冰上 馬克筆 1 支 5X(倍)濃度限制酶反應緩衝液 1 管(15) 計時器 1 個 EcoRI 限制酶 1 管(10) 膠水 1 支 XhoI 限制酶 1 管(10) 迷你離心機 1 個 質體A 1 管(4) 有編號的離心管水浴浮盤 1 個 質體B 1 管(4) 有編號的培養皿(盛裝膠片用) 1 個 質體C 1 管(4) 電泳槽 1 個 DNA 加注染料(標示:Dye) 1 管(15) 水浴槽(37°C) 公用 尺標DNA(標示:M) 1 管(20) DNA 膠片照相系統 公用 ※ 請注意： 1. 請確認考生編號是否正確；若有誤，請舉手請助教處理。 2. 桌上的藥品及器材用完後，將不再補充。 3. 公用儀器運用請依照指示使用 。 4. 本試卷（含封面、試題卷）共 6 頁，於交卷時全部繳回。 5. 作答時間90 分鐘，請於本卷上作答 。試題答案可寫至題目背面，但請註明並標上題號。 1 第 II部分 限制酶切位檢測建構質體組成 (50分) 背景介紹： 細胞常會依據環境中的養分狀況來調控相關基因的表現，在出芽酵母菌中，與半乳糖 (galactose)代謝相關的基因調控便是一個被深入研究的例子 (圖1) 。當環境中沒有葡萄糖 (glucose) ，但有galactose 時，會活化轉錄因子Gal4 ，去增加相關基因(GAL genes)的表現 ，製 造出參與galactose 運輸和代謝相關的蛋白，包括Gal2 、Gal1 、Gal7 和Gal10 等 。Gal2 將胞 外的galactose 運送至細胞質(cytoplasm) ，Gal1 將細胞質中的galactose 轉化為galactose-1P ， Gal7 和Gal10 則參與galactose-1P 轉化為glucose-1P 的反應。而Gal4 轉錄因子活性的調控則 是整個系統的關鍵所在 ，沒有galactose 時，Gal4 會附著於GAL genes 啟動子的調控區域 (UASGAL) ，但其活性受到抑制蛋白Gal80 的抑制；當環境中的galactose 藉由原本已有的少量 Gal2 運送至胞內後，另一個調控蛋白Gal3 會與galactose 及ATP 結合，並進入細胞核(nucleus) 內，驅除Gal80 而活化Gal4 ，進而引發GAL genes 的大