刚果出血热病毒核蛋白复合体组装机制的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 张培生 2015 年 5 月 28 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2年(可少于2年);秘密★10年(可少于10年);机密★20年(可少于20年) 摘要 摘要 摘要 克里米亚-刚果出血热（Crimean–Congo haemorrhagic fever，CCHF）是一 类严重的蜱虫传播疾病，病原体是克里米亚-刚果出血热病毒（Crimean–Congo haemorrhagic fever virus, CCHFV），在非洲，亚洲，欧洲东部及中东地区均有分 布。克里米亚-刚果出血热病毒具有很强的传染能力，通过蜱虫叮咬，与带有病 原体的病人接触以及接触携带病原体生物的血液、组织等途径均能感染该病毒。 由于克里米亚-刚果出血热传播地域广泛，致死率高，严重危害人类公共健康安 全，担心被用作生物武器等，使得对克里米亚-刚果出血热病毒的研究变得尤为 重要。 CCHFV 是有包膜的反义单链 RNA 病毒，属于布尼亚病毒科，内罗病毒属。 CCHFV 基因组包括三个单股负链 RNA 片段，称为大（L）、中（M）和小（S） 片段。 L 片 段 编 码 一 个 RNA 依赖的 RNA 聚合酶（ RNA-dependent RNA polymerase，RdRp），M 片段编码一个糖蛋白前体，进而加工产生两个糖蛋白 Gn 和 Gc（glycoprotein Gn and Gc），S 片段编码一个核蛋白（nucleocapsid protein， NP ）。 NP 蛋 白 包 裹 基 因 组 RNA ，与 RdRp 一 起 形 成 核 糖 核 蛋 白 复 合 体 （ribonucleoprotein complex, RNP），由于基因组 RNA 只有以 RNP 形式存在时才 能完成复制与转录过程，因此 RNP 在 CCHFV 的生活周期中起到核心作用。 我们首先分离出 CCHFV NP-RNA 复合体，并进一步确认分离出的 NP 蛋白 为寡聚体并结合有核酸，通过电镜三维重构方法得到一个环形三维重构模型， 并进一步与 CCHFV NP 的晶体结构进行了 docking 模型搭建。在 CCHFV NP-RNA 复合体中，NP 单体蛋白采用首尾相连的方式按顺时针方向相互作用，完成 CCHFV NP 蛋白的多聚化。同时表明 NP 蛋白的 head 与 stalk 结构域可能共同参 与了 NP 与 RNA 的相互作用。本研究揭示了 CCHFV NP-RNA 复合体的组装机 制，将有助于针对 CCHFV 特异性药物靶点及疫苗的开发。图 20 幅，表 3 个， 参考文献 73 篇。 关键词：刚果出血热病毒；核蛋白复合体；电镜三维重构 I Abst Abstract Abstract Crimean–Congo haemorrhagic fever (CCHF), caused by Crimean–Congo haemorrhagic fever virus (CCHFV), is a severe tick-borne zoonotic viral infection found in part of Asia, Europe, Africa and the Middle East. Humans would pick up the disease by bites of infected ticks, or by direct contact with body fluids of infected livestock or humans. Due to the high mortality rate of CCHF, the lack of a licensed vaccine and effective therapeutic approach, and the fea