从黑曲霉固态发酵产物中纯化α-L-鼠李糖苷酶及酶法制备普鲁宁.pdf

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2015，Vo1．31，No．1 从黑曲霉固态发酵产物中纯化 一L一鼠李糖苷酶及酶法 制备普鲁宁 胡群芳’，李利君 ，陈艳红 ’，倪辉 一，肖安风 ’’一，陈峰 ，蔡慧农 ’。 (1．集美大学生物工程：学院，福建厦门 361021)(2．福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门 36l021) (3．厦门市食品与生物工程技术研究中心，福建厦门 361021)(4．美国克莱姆森大学食品科学、营养与包装科学系， 南卡 罗琳期州 29634) 摘要 ：本文研究了从黑曲霉固态发酵产物中纯化a—L一鼠李糖苷酶，并探究利用该酶转化柚皮苷制备普鲁宁。用黑曲霉固态发酵 柚皮产生a．L．鼠李糖苷酶，通过40％～80％硫酸铵沉淀、疏水层析、亲和层析和凝胶过滤层析，从黑曲霉固态发酵产物中分离纯化得 到了1种a．L．鼠李糖苷酶；该酶为单体分子量约为 160kDa；它由二硫键连接的两个肽段构成，其中有一个大肽段分子量约为 130kDa。 其水解柚皮苷的最适温度为50,-60℃，最适pH4．0~5．0，米氏常数和最大酶反应速度分别为0．24gmolm／L和312．5Um／L。用该酶转 化柚皮苷制备普鲁宁的最适反应时间为60~90min，柚皮苷转化率达98％vX_k。转化产物中普鲁宁的含量在95％以上，普鲁宁的分解 产物柚皮素的含量小于5．0％。用从黑曲霉固态发酵产物中纯化的6c—L一鼠李糖苷酶制备普鲁宁具有热稳定性好、底物亲和力强、转化 率高和副产物少等优点，为开发酶法制备普鲁宁的工艺提供了重要参考。 关键词：黑曲霉；固态发酵；a．L．鼠李糖苷酶；纯化；柚皮苷；普鲁宁 文章篇号：1673．9078(：1015)1．107—114 DOI：10．13982~．mfst．1673—9078．2015．1．020 Purificationofa．．L．．rhamnosidasefrom theSolid．．stateFermentation ProductofAspergillusnigerandItsApplicationinEnzymaticProduction ofPrunin HUQun．fang，LILiqun，CHENYan．hong，NIHui’ ，XIAOAn．feng’ ，CHENFeng ，CAIHui-nong，。 (1．CollegeofBioengineering，JimeiUniversity,Xiamen361021，China) (2．FujianProvincialKeyLaboratoryofFoodMicrobiologyandEnzymeEngineering，Xiamen361021，China) (3．ResearchCenterofFoodBiotechnologyofXiamenCity,Xiamen361021，China) (4．DepartmentofFood，nutritionandpackageScience，ClemsonUniversiyt,SouthCarolina29634，UnitedStates) Abstract：Inthisstudy,。c-L-rhamnosidasewaspurifiedrfom theproductofsolid—statefermenattionofpomelopeelpowderbyAspergillus nigerand usedtoconve~ nafingin to prunin．a—L—rhamnosidasewasisolatednad purified byprecipiattion usingammonium sulfateat concentrationsrnagingfrom40％ tO80％，hydrophobicinteractionchromatography，affinitychromatogra