一种适宜棉花microRNA实时定量分析的总RNA提取方法.pdf

花 学 报 Cotton Science 20 13 25 渊5 冤院467~470 种适宜棉花microRNA 实时定量分析的 总RNA 提取方法 道乾 WANG Gaskin 杜雄明* (中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室 河南安阳455000) 摘要 为满足棉花组织micro RNA 结构与功能研究的需要 建立了棉花高质量的总RNA 提取方法遥 以陆地棉 纤维和胚珠为供试材料 采用改良的异硫氰酸胍- 硫氰酸铵- 酸酚法提取总RNA 利用stem-loop RT-qPCR 法 鉴定成熟的miRNA遥 结果表明此方法能得到高质量的总RNA 并且miRNA 的回收率较高 足以满足mi- croRNA 水平的实时定量分析遥 关键词 棉花曰总RNA 曰提取曰microRNA 曰实时定量 中图分类号 S562.035.3:Q812 文献标志码 A 文章编号 1002-7807(2013)05-0467-04 YU Dao-qian, WANG Gaskin, DU Xiong-ming* 渊 455000, 冤 A method for isolation of total RNA species is presented. The modified guanidinium isothiocyanate- ammonium thio- cyanate-acid phenol method was used to extract total RNA from fiber and ovule of cotton ( L.). The stem-loop Real-time PCR method was selected to identify mature miRNA. Experiments validated that the method we used was suitable for quantitative analysis of miRNA because of the high quality of total RNA and high recycling efficiency of miRNA. cotton; total RNA; extraction; microRNA; real-time PCR 花基础研究主要集中于DNA 尧mRNA 水 miRNA 的实时定量研究遥 平 较少涉及microRNA (miRNA) 等小RNA 水 平遥 近年在其他植物中的研究发现 miRNA 几乎 材料和方法 [1-2] 参与了全部组织器官的发育过程 遥 MiRNA 研 实验材料 究所面临的首要问题是如何高效地提取和纯化遥 陆地 ( L.)遗传标准系 目前有多种RNA 提取方法和商品化的试剂盒可 TM-1 由本实验室保存曰 实验相关玻璃器皿于 供选择 但真正适 于棉花胚珠尧纤维这类多糖 180 益干热处理至少3 h 曰塑料容器尧耗材及配制 组织的却少见遥 LiCl 法因沉淀DNA尧蛋白和多糖 药品的ddH O 终浓度为0.1%的DEPC 处理 2 的能力强而被广泛选 [3] 但其沉淀小分子量 过夜曰引物由英潍捷基公司合成曰化学纯试剂 RNA 的效率不高曰试剂盒成本较高且提取的棉花 购自BBI 公司遥 总RNA 特别是miRNA 产