菌内毒素检查法培训---新乡市药检所肖健.ppt

简况 历史回顾与发展趋势 细菌内毒素 鲎试剂检测内毒素的机理 2010年版药典细菌内毒素检查法介绍 一、简况 一百多年前，在西方医学发展史上，一个最重要的发展就是注射给药（特别是静脉注射）方式的创立。毫无疑问它在人类与疾病作斗争的过程中起了重要作用，但是无论过去还是现在，临床上使用注射剂时经常出现注射引起的发热、头痛、恶心、肤色灰白、昏迷等，甚至导致患者死亡，这些反应总称为不良反应。不良反应可分为热原反应和过敏反应。因此，注射剂的热原检查是保证药品安全的重要检验项目之一。 1912年第一次考虑用家兔做热原试验，1942年美国首先将家兔热原检查方法收入药典。中国药典于1953年开始收载。因此，半个世纪以来，家兔法对保证药品临床使用的安全发挥了重要的作用。但是，随着科学技术和制药工业的发展，这一检查法的局限性越来越明显，所以用新的检验方法代替家兔法检测热原早已成为国内外医药界科研、生产、临床检验等部门很紧迫的问题，基于科学实践发展的要求从而发现并建立了细菌内毒素检查方法。 细菌内毒素试验方法有： 凝胶法（Gelation assay）属限量； 浊度法（Turbidimetrec assay）属定量； 显色底物法（Chromogenic assay）属定量法； 免疫方法（Immumology assay）等。 历史回顾和发展趋势 1、历史回顾 美国是发明鲎试剂和最先建立鲎试验方法的国家。 1956年，美国动物学家F.Bang发表论文《鲎的一种细菌性疾病》，阐述了细菌内毒素使鲎血凝固的现象。 1964年，F.Bang和J.levin提出了鲎血凝集的初步机理。 1968年，F.Bang和J.levin建立了鲎试验的方法。 1973年，美国食品药物管理局（FDA）承认鲎试剂为一种生物制品。 大肠菌群及检验 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 　　大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 　　 大肠菌群检验方法 由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 　　目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 1980年，FDA制定了用鲎试剂检查人用和兽用注射药内毒素的准则；美国药典20版（USPXX）收载细菌内毒素检查法（BET），但在药典各品种正文中未涉及。 1983年，USPXX版第四增补本规定了注射用水等5种常用药品和40种放射性药品用细菌内毒素检查取代热原检查。 1991年，USPXXⅡ版第五增补本规定185种药品以细菌内毒素检查取代热原检查。 1995年，USPXXⅢ版规定471种药品用细菌内毒素检查法检查，保留热原检查的药品不足30种。 1999年，USPXXⅣ版规定670种药品用细菌内毒素检查法检查，保留热原检查的药品约20种。 2000年，国际调和委员会使美国药典（USP）、欧洲药典（EP）和日本药局方（JP）达成《BET的国际调和案》，统一的BET已收载于USPXXⅣ和NF19的第二增补本中，并于2001年1月1日生效。 英国、欧洲药典以及日本药局方都已收载细菌内毒素检查法，但规定检查的品种各有不同。一个共同的特点是注射水是最先被允许检查的品种。 中国目前是世界上鲎试剂产量最大的国家之一。 1975～1982年是我国鲎试剂的研制阶段，当时由于缺乏标准化研究的基础，上千批次的实验结果难于分析。 1983年，卫生部授权国家药品生物制品检定所组织全国范围的大输液及放射性药品鲎试验的协作研究。 1988年，卫生部颁布细菌内毒素检查法，允许4种药品使用