ABI7500仪器验证方案.doc

编号： ABI 7500验证方案 方案制定： 日期： 方案审核： 日期： 方案批准： 日期：  上海**生物技术有限责任公司 1、简介 ABI7500实时荧光定量PCR仪，是美国应用生物系统公司推出的基于微孔板的高通量实时定量PCR系统，其反应速度及准确性、操作实用性和使用灵活性均有较好的提高，能满足科研工作者对于定量PCR系统高通量方面的要求，是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。它主要有一台ABI 7500 Block kit 96和PC计算机及显示器组成。 2、验证内容 ABI7500实时荧光定量PCR仪的验证，主要从以下几个方面进行：PC计算机运行环境的确认、ABI7500运行软件及分析软件的确认、ABI7500 PCR扩增及荧光检测系统的确认。 3、验证目的 通过用HBV荧光PCR检测试剂盒来确认ABI7500实时荧光定量PCR仪的扩增和检测体系精密度、线性、准确度等，验证仪器能否正常准确运行，给出可靠的分析结果，以及96孔孔间差异是否在允许范围内。 4、验证内容 4.1 PC计算机运行环境确认 4.1.1 运行环境确认内容 检查配套计算机能否正常开机运行，是否有中病毒等现象，能否为ABI7500运行软件和分析软件提供安装平台和运行平台。 4.1.1.2 结果记录 4.2 ABI7500运行软件及分析软件的确认 4.2.1 软件确认内容 双击电脑桌面上的ABI7500运行软件及分析软件的图标，看应用软件能否打开，能否正常使用。 4.2.2 结果记录 4.3 ABI7500 PCR扩增及荧光检测系统的确认 4.3.1 灵敏度和线性 4.3.1.1 方法 利用HBV荧光PCR检测试剂盒，配制20支HBV-PCR Mix，并分别加入HBV 企业灵敏度质控品（3.0E2,3.0E3,3.0E4，3.0E5，3.0E6，3.0E7）、阴性对照、空白对照，均做复管，按照说明书的操作步骤进行。 4.3.1.2 合格标准 （1）空白对照和阴性对照无起跳 （2）经标化的企业灵敏度质线性相关系数R≥0.98，复管重复性良好。 4.3.1.3 数据记录 4.3.2 孔间差异 4.3.2.1 方法 利用HBV荧光PCR检测试剂盒，配制96支HBV-PCR Mix，88支分别加入相同的模板HBV standard(3.0E4)，另有3支加入不同浓度的HBV standard 3.0E7（管号91）、HBV standard 3.0E6（管号90）、HBV standard 3.0E5（管号89），剩余5支分别为临界对照（管号92）、阳性对照（管号93）、阴性对照（管号94，管号96）、空白对照（管号95），同时进行实时扩增检测。 4.3.2.2 合格标准 （1）空白、阳性对照无起跳 （2）每孔相对偏差值不大于8% 4.3.2.3 数据记录 4.3.2.4 数据分析 孔间差计算方法： CTi ×100% (CT1 +CT2 +CT3 +……CTn)/n 5 异常情况处理 在验证的过程中，应严格按照验证方案操作，若出现个别项目不合格，应查明原因后重新进行验证。如果属于仪器设备原因，则由验证小组和质量部负责人协同处理或联系厂家进行维修，并填写相应记录。 6 验证最终结果分析和评定 评定人： 评定时间： 7再验证周期 7.1 在一般情况下每一年验证一次。 7.2 如更更换仪器零部件或重大维修，完成后均要再次验证，以证明更换零部件及维修对仪器的正常使用没有影响。 7.3 再验证启动时，按照完整程序进行。 8 验证批准 批准人： 批准时间：