蛋白质测定-凯氏定氮法课件.ppt

奶粉中蛋白质的测定——凯氏定氮法;【基础知识】;【一、实验目的】;　注意：此法测定得到的蛋白质含量，实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物，故称为粗pro。;1、消化;试剂;样品称量、消化;揉绅楷秧全散焦早咸逞蒸郧隘凳酪灌蜡判稍符撼荚湛皱践皱线腻蔚迅啄括蛋白质测定-凯氏定氮法课件蛋白质测定-凯氏定氮法课件;2、蒸馏、吸收;凯氏定氮蒸馏装置;水蒸气发生器： 　　装水至2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红乙醇指示剂数滴及硫酸数ml，使水呈微红色（保持酸性以防水中氨的逸出）→按上图所示搭好装置;蒸馏及吸收;[注意] ①加NaOH一定要过量，此时溶液生成深蓝色或黑色沉淀 ②为防止样液中氨气逸出。一是要水封，二要夹紧废液蝴蝶夹后再通蒸汽，三要注意接头处有无松漏现象;③ 冷凝管下端先插入硼酸吸收液液面以下才能蒸馏。吸收液温度不应超过40℃，避免氨气逸出，若超过时可置于冷水浴中使用。 ④ 在蒸馏时，蒸汽发生要均匀充足，蒸馏过程中不得停火断汽,否则会发生倒吸。 ⑤ 蒸馏完毕后，先将冷凝管下端离开液面，再蒸1分钟，将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内，再将吸收瓶移开，最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液将发生倒吸。 ⑥所用的试剂溶液 必须用无氨蒸馏水配制。; 3、盐酸滴定;项目名称;有效数字： 蛋白质含量≥1 g/100 g时，结果保留三位有效数字 蛋白质含量＜1 g/100 g时，结果保留两位有效数字。 精密度： 在重复性条件下的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%;小结;凯氏定氮法用于所有动物、植物类食品的蛋白质含量的测定，但因样品中含有核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白质含氮化合物，所以测定结果为粗蛋白质含量。 若要测定样品的蛋白氮,则需要向样品中加入三氯乙酸溶液,使其最终浓度为5%,然后测定未加入三氯乙酸的样品及加入三氯乙酸溶液后样品中的含氮量,进一步计算出蛋白质含量: 蛋白氮=总氮-非蛋白氮;准确称取某乳粉样品0.800克，经凯氏法消化定容至100ml，移取5ml消化液进行蒸馏，用20ml硼酸吸收，再用0.05000mol/lHCl滴定，结??消耗5.00ml，试计算该乳粉的蛋白质含量？ 试述蛋白质测定中，样品消化过程所必须注意的事项，消化过程中内容物颜色发生什么变化？为什么？ 样品经消化进行蒸馏前，为什么要加入氢氧化钠？这时溶液发生什么变化？为什么？如果没有变化，说明什么问题？须采用什么措施？;知识拓展：三聚氰胺假蛋白“原理”;1、 先用三氯乙酸溶液处理样品，使其最终浓度为5%, 。三氯乙酸能让蛋白质形成沉淀。