亚细胞组分分离鉴定.pptVIP

亚细胞组分的分离鉴定 常用的亚细胞组分分离方法（P14） 差速（分级）离心法 交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法 特点：介质密度均一，速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀 细胞器沉降的顺序：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体 密度梯度离心法 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离 分为速度区带离心和等密度离心两种 超速离心 离心力在100000 ×g 以上的离心。用于分离或分析鉴定病毒颗粒、细胞器或大分子生物样品等。 在操作技术上，最常用的是差速离心和密度梯度离心。 常见的离心机种类 离心机的使用 离心机在运转时，不得移动离心机。 离心机必须放置在坚固水平的台面上，并且保持离心机的平稳，以免产生振动。 放置离心管时需注意配平：加液应称量平衡；试管必须对称放入 加液体积应小于离心管体积2/3 若运行时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理 亚细胞组分的分离及观察鉴定 实验目的 了解亚细胞组分分离的基本方法及原理和过程。 掌握细胞生物学基本实验操作和实验的综合能力。 实验原理 细胞内不同的亚细胞组分其比重、大小和形态都不相同，在同一离心场内或不同密度介质条件下离心时其沉降速度也不相同。根据这一原理，常用差速离心法和密度离心法将细胞内各种组分分离出来。 实验步骤（P46） 实验步骤 实验报告 姓名：班次：组别：实验室：日期： 一、实验题目 二、实验目的 三、实验原理 四、实验结果 图示实验流程及细胞核、线粒体镜检结果 五、分析与讨论 六、思考题（P47） 下次实验 生物分子在细胞内定位与分布的分析方法 （DNA的Feulgen反应） * * * * * 1. 差速（分级）离心法 2. 密度梯度离心法 速度区带离心法 等密度离心法 3. 超速离心法 只用于分离密度和大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器 可分离各种细胞、病毒、染色体、脂蛋白、DNA和RNA等生物样品 6000r/min<高速离心机<25000r/min 超速离心机>25000r/min 低速离心机<6000r/min 3. 离心，得上清 1 2. 取大约2g大小的肝组织，匀浆，过滤 1. 家兔处死，取肝组织。（已完成） 4. 沉淀加蔗糖混匀，离心，得上清 2 7.染色 6.上清 1 & 2 混匀，离心，得到的沉淀再加蔗糖混匀离心，得沉淀（线粒体）