蛋白质工程习题.docx

分子报告:报告分子是一类易于检测的蛋白质，将其与目的基因融合，通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控，分子报告即是这样的一种标定检测技术。该技术具有高灵敏度、检测方便且适合大规模检测的优点。具有以下特点：报告分子应不存在于宿主中或易于和内源性基因相区别；应该有一个简单、快速、灵敏及经济的分析方法来检测报告分子；报告分子的分析结果应该具有很宽的线性范围，以便于分析启动子活性的幅度变化；报告基因的表达必须不改变受体细胞或生物的生理活动。核酶：核酶(ribosome)指的是具有催化活性的RNA, 即化学本质是核糖核酸(RNA), 却具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子, 有些作用底物就是同一RNA分子中的某些部位。核酶的功能很多,有的能够切割RNA, 有的能够切割DNA, 有些还具有RNA 连接酶、磷酸酶等活性。与蛋白质酶相比，核酶的催化效率较低，是一种较为原始的催化酶。此外，一些单链DNA同样具有生物酶活性，目前只能人工合成。RNA核酶主要有以下几种：Ⅰ型内含子、Ⅱ型内含子、RNaseP的RNA亚基、发夹状核酶、锤头状核酶、肝炎δ病毒核酶、VS核酶。3、什么是固定化酶，固定化酶的特点？1固定化酶的定义固定化酶是指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。固定化酶既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，具有增加稳定性，可反复或连续使用以及易于和反应产物分开等显著优点。2 固定化酶的特点(1)稳定性:固定化酶的稳定性一般比游离酶的稳定性好。(2)最适温度: 固定化酶的最适作用温度一般与游离酶差不多，活化能也变化不大。(3)最适pH值: 酶经过固定化后，其作用的最适pH值往往会发生一些变化。影响固定化酶最适pH值的因素主要有两个，一个是载体的带电性质，另一个是酶催化反应产物的性质。(4)底物特异性: 固定化酶的底物特异性与游离酶比较可能有些不同，其变化与底物分子量的大小有一定关系。对于那些作用于低分子底物的酶，固定化前后的底物特异性没有明显变化。固定化酶底物特异性的改变，是由于载体的空间位阻作用引起的。什么是基因融合技术？基因融合技术的特点?概念：将不同的基因或者基因片段序列构成一个新的杂合基因，经合适的表达系统表达后，获得由不同功能蛋白拼合在一起的新型多功能蛋白的技术。手段是将第一个蛋白基因的终止密码子删除，接上带有终止密码子的第二个蛋白或者多肽基因，实现两个基因的融合表达。特点：1、通过与一特异性蛋白质或者其特异的结构域形成融合入蛋白，可使表达产物得到有效的回收和纯化；2、通过与不同功能的蛋白质融合，产生新的多功能的蛋白；3、与报告分子的融合蛋白结合，应用于蛋白定位和转基因动物；4、避免目的产物被快速降解，稳定表达产物的产率；5、改变目的蛋白在胞内的溶解性，防止包涵体的产生；6、将表达的外源蛋白定向地定位在宿主的不同区域；7、通过想形成融合蛋白，再切去融合部分，能可靠可重复的获得蛋白质；8、是基因改造的手段，应用于蛋白质结构功能的研究。二、什么是亲和层析？如何根据目的产物选择洗脱方式？亲和层析 是利用蛋白质和配体专一性识别并结合的特性而分离蛋白质的一种层析方法。洗脱抗原上的抗体时，采用游离的抗原进行洗脱，也可降低PH来洗脱（2.8），酶和其底物，抑制剂和激活剂，糖蛋白和糖链，DNA结合蛋白和DNA，膜受体蛋白和激素，带有标签的基因融合蛋白和该标签的特异性结合物（如组氨酸标签和镍离子）。