中药指纹图谱与特征图谱.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * 指纹图谱的建立 根据足够样品数（10批次以上）测试结果所给出的峰数、峰值（积分值）和峰位（保留时间）等相关参数，确定共有指纹峰（相对保留时间、峰面积比值），选取特征指纹峰群（色谱峰组合），制定指纹图谱。采用阿拉伯数字标示共有峰，用“S” 标示参照物峰。 中药材指纹图谱要对不同产地、不同等级规格 或不同采收季节等的代表性样品进行分析比较，从中 归纳出中药材共有的、峰面积相对稳定的色谱峰作为 特征指纹峰。对于多来源的中药材，必须考察品种间 的特异性。 中药制剂指纹图谱的建立，要将原药材、半成品、 成品之间的图谱进行比较，考察相互之间的相关性。 指纹图谱的辨认应注意指纹特征的整体性，从 整体的角度综合考虑，注意各具有指纹意义的谱峰 之间相互的依存关系。 指纹图谱的评价指标是供试品指纹图谱与该品 种对照用指纹图谱(共有模式)及供试品之间指纹图 谱的相似性。 相似性比较可以用“相似度”表达，一般指纹图 谱相似度计算结果在0.9~1.0(或以90~100表示)之间 即符合要求。 指纹图谱的相似性从两个方面考虑: ①色谱的整体面貌是否相似，以判断样品的真实性； ②供试品与对照样品或“对照用指纹图谱”之间及不同批次样品指纹图谱之间总积分值作量化比较，如总积分面积相差较大(如±20%)，则说明同样量的样品含有的内在物质有较明显的“量”的差异，这种差异是否允许，应视具体品种、具体工艺的实际情况，并结合含量测定项目综合判断。这种比较应在同一台仪器平行进行测定。 中药指纹图谱分析及评价 根据指纹图谱所获取的信息，建立指纹图谱分析比较的重要参数，如共有峰、重叠率、n强峰、特征指纹等；计算特征指纹的相似率与差异率，进行指纹图谱评价；应用相似度分析、主成分分析、聚类分析或人工神经网络等计算机技术，进行解析、识别图谱信息以及图谱相似度评价，以建立可行、实用的中药指纹图谱量化评价标准。 （一）重要参数的建立 1. 共有指纹峰 中药指纹图谱中，多个样品所具有的相同相对保留值的色 谱峰，即为共有指纹峰。 (1) 共有指纹峰的相对保留时间：相对保留时间=tR/tRs。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 没食子酸 大黄素 图5-2 大黄HPLC指纹图谱 (2) 共有指纹峰面积比值：指纹峰面积比值=A/As 各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。 未达基线分离的共有峰，以该组峰的总峰面积 计，同时标定该组各峰的相对保留时间。 非共有峰：供试品的图谱与指纹图谱比较，共有指纹峰以外的相对保留值不同的色谱峰。 特征指纹峰 所有供试品图谱中均存在的色谱峰，可以认为 它们是该中药品种所特有，故又称之为特征指纹峰。 特征指纹是指由一系列特征指纹峰所组成的固定 峰群，从多组分的角度来反映中药内在特征，为原药 材或饮片品种鉴定，特别是同属不同种或含相同有效 成分不同种的药材的鉴别，提供更多更细致的信息和 依据。 要求“准确的辨认”而不是“精密的测量”； 比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求“相似”而不是“相同”。 评价色谱比较的结果，是根据其模糊属性，着眼于宏观的规律性的特征分析，即着重辨认完整色谱的“图貌”，而不是求索细枝末节。 计算机辅助相似度评价 第三节 中药指纹图谱研究实例 例1 中药大黄指纹图谱研究 (一) 基源 为蓼科植物掌叶大黄Rheum Palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。 (二) 产地 掌叶大黄主产于甘肃、青海、西藏、四川等地；唐古特大黄主产于青海、甘肃、西藏及四川等地。二者商品均称为“西大黄”、“北大黄”。药用大黄主产于四川、贵州、云南、湖北、陕西等地，商品称为“南大黄”、“川大黄”。商品以掌叶大黄产量大，唐古特大黄次之，药用大黄少见。 据产地考察及调查，甘肃庄浪、礼县大黄种植面积约6666.67km2，年产量约5万吨，资源十分丰富。 甘肃主产区大黄资源分布图 (三) 化学成分 主含蒽醌类成分：大黄酸(rhein)、大黄素(emodin)、大黄酚(chrysophanol) 、芦荟大黄素(aloe-emodin)、大黄素甲醚(physcion)、番泻苷A、B、C、D、E、F(sennoside A、B、C、D、E、F)、大黄酸-8-葡萄糖苷(rhein-8-mono-β-D-g