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试剂标准操作规程
项 目 尿素测定试剂(UN) 方 法 尿素酶法?氨消去法
编写人 日期 审核人 日期 批准人 日期 文件分发部门和/或个人 本规程自200 年 月 日起实施,每1年复审一次
医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 临床化学检验室
目 录
检测原理
标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
1. 检测原理
本方法原理反应方程式如下:
[第一反应]
GLDH
NH3+α-酮戊二酸 谷氨酸+H2O
NADPH2 NADP
[第?二反应]
尿素酶
尿素+H2O 2NH3 + CO2
GLDH
NH3+α-酮戊二酸 谷氨酸+H2O
NADPH2 NADP
第一反应如上,除去血清中内原性氨。在第二反应中,在尿素酶的作用下,尿素分解为氨,然后,根据谷氨酸脱氢酶的辅酶的减少量测定氨的含量
2.标本采集与处理
2.1 受检者的准备:
病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
为了前后比较应在每年同一季节检验,应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血:
除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂:
肝素或EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。
2.4 标本处理:
血标本室温放置30min~45min后离心分离血清,置洁净试管加盖低温保存。
3.试剂
3.1 试剂:
本科使用上海蓝怡科技有限公司代理的日本协和UN试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:
试剂名 成分名 含量 试剂R-1 谷氨酸脱氢酶(GLDH)
NADHP2
α-酮戊二酸
缓冲剂
稳定剂 20IU/ml
0.3IU/ml
10mmol/l 试剂R-2 尿素酶
α-酮戊二酸
缓冲剂
稳定剂 28IU/ml
17mmol/l
3.2 校准血清:
使用日本协和提供的UN标准液。
校准频次:
空白定标:每日需做试剂空白定标。
全点定标:试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围,需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性:
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后,在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天,试剂应避免污染。
4.仪器
AILEX CA400仪器。
5.操作
样品为血清。本法为速率法。参数见后附,附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作,见仪器操作规程。
6.计算
c= ΧCO
式中:c—— 测定血清UN浓度,umol/L;
△A测定—— 标本管吸光度;
△A标准—— 标准管吸光度;
CO—— 校准血清中UN浓度,umol/L;
△A =A2-A1
7.—7.14 mmol/L
9.临床意义
尿素是蛋白质代谢最终产物,在正常血清中,非蛋白氮(NPN)50%为尿素。尿素主要通过肾排泄。在临床,血中尿素的浓度被作为肾机能的指标。
附录A:(CA400 UN参数)
Name UN Normal Range 2.86-7.14 Technical Range 0.00-42.87 Unit mmol/L Assay Type Rate Wave length-Prim/sec 340/415 Measuring Points 1 Start-End 42-68 2 Start-End Normal S.Vol 3.5 Reagent 1 R.Vol 240 Reagent 2 R.Vol 80 Decimal Points 2 Calib Type Linear K因子 - Sampling Duplicate S1 Conc 0--# S2 Conc 标示值--# S3 Conc S4 Co
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