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大肠菌群计数检验 大肠菌群是指一群在37°C培养24小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义 食品中大肠菌群数系以每100g（或mL）检样内大肠菌群最可能数（the?most?probablenumber-简称MPN）表示。 第一法 大肠菌群MPN 计数法 第二法 大肠菌群平板计数法 第一天 第1、3、5、7小组： 使用第一法（附带做第二法中，两个平板接种），以自来水为样品。 第2、4、6小组： 使用第二法（附带做第一法中，3个试管初发酵试验），以污水为样品。 第一法：检样稀释与初发酵试验 MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用9管法. 一般样品25ML（克）+225ML生理盐水=1：10，从10-1取样1ML，接种到3管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。 从10-1取样1ML+9 ML生理盐水=1：100，从10-2取样1ML，接种到3管LST中。 从10-2取样1ML+9 ML生理盐水=1：1000，从10-3取样1ML，接种到3管LST中。 第二法：检样稀释与平板计数 检样稀释：同上。 平板计数： 1、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。 2、及时将15—20mLVRBA（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。 3、待琼脂凝固后，再加3—4mLVRBA覆盖表层。翻转平板培养。 第二天 第一法 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 第二法 平板菌落数的选择与证实试验 平板菌落数的选择 选取菌落数在15CFU～150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 或更大。 证实试验 从VRBA 平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。 （2）原理 溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。 胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。 分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。 第四天：大肠菌群计数报告 第一法： 确证大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。 第二法： 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。 * * 旧国家标准 1　产气 2　不产气 杜氏发酵管产气情况 *