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牛乳大肠菌群复发酵实验 BGLB液体接种操作 实训目的 进一步理解大肠菌群检测的操作流程 了解大肠菌群液体接种方法 · 进一步熟悉无菌操作要点 实训仪器与设备 酒精灯、接种针、火柴、75%酒精棉、LST肉汤培养物、BGLB肉汤培养基 实训步骤 1、LST肉汤培养基的产气检查 观察培养完毕的LST肉汤培养液，观察小倒管中是否有气体产生。若有气体产生，则疑似大肠菌群，需要进行BGLB肉汤培养基接种。 LST肉汤 BGLB肉汤 结果 1：10 产气 产气 阳性 1：100 产气 产气 阳性 1：1000 产气 产气 阳性 2、BGLB液体接种 将产气的LST肉汤培养基进行液体接种。 在酒精灯上灼烧接种环，从LST肉汤培养基中挑取一环菌液，接种于BGLB肉汤培养基中，36℃培养48小时后。观察产气情况。 液体接种操作要点： 1、操作前消毒 2、接种环灼烧完全，镍丝要烧红。 3、棉塞夹于拿接种针手的无名指和小指之 间 4、打开棉塞后试管口要在酒精灯旁，避免杂菌进入。 BGLB接种操作问题： 1、如何进行LST肉汤培养基的产气检查？ 2、如何用接种针进行挑菌操作？ 3、液体接种过程中如何使用才能保证无菌状态？ 1、观察试管内的小倒管，如果小倒管有气泡存在或者小导管上漂，说明试管产气。 2、首先点燃酒精灯，在酒精灯旁进行操作。其次接种前充分灼烧接种针，将镍丝烧红为止。接种时将试管放于酒精灯上方火焰外焰处，棉塞加于无名指和小指之间。 3、吸量管在使用前进行灼烧，拿管要求远离实训服，使用前检查是否包扎完好无玻璃外露。 思考题： 1、大肠菌群检测流程 2、回顾初发酵试验步骤 3、大肠菌群检测涉及到几种培养基？LST肉汤培养基的制备步骤、配方是什么？ 2、初发酵实验步骤 1）称取25g固体样品，加入225mL无菌水中，均质制备成1：10 样品溶液。 2）用1只1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法各取1mL，分别加入到3只LST肉汤培养基中。 3）吸取1mL1：10样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：100样品溶液。 4）换1只吸量管各取1mL1：100溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。 5）吸取1mL1：100样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：1000样品溶液。 6）换1只支吸量管各取1mL1：1000溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。 7）36度±1度，48小时±2小时培养后观察 3、2种培养基，LST肉汤培养基和BGLB肉汤培养基。 LST肉汤培养基：胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g氯化钠 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸钠 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.8±0.2 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。
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