第六章 病原菌检测_培训课件.ppt

蛋白胨 1.0 g,氯化钠 5.0 g，葡萄糖 1.0 g，磷酸二氢钾 2.0 g 0.4％酚 红 3.0 mL，琼 脂 20.0 g，蒸馏水 1 000 mL 20%尿素溶液 100 mL，pH7.2±0.2 除尿素、琼脂和酚红外，将其他成分加入400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL 蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂后分装，121 ℃高压灭菌15 min。冷至50 ℃～55 ℃,加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2％。分装于无菌试管内，放成斜面备用。 A.9 尿素琼脂（pH 7.2） 试验方法 挑取琼脂培养物接种,在36 ℃±1 ℃培养24 h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。 蛋白胨 10.0 g，氯化钠 5.0 g，磷酸二氢钾 0.225 g 磷酸氢二钠 5.64 g，蒸馏水 1 000 mL，0.5％氰化钾 20.0 mL 将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，分装后121 ℃高压灭菌15 min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL 培养基加入0.5％氰化钾溶液2.0 mL（最后浓度为1:10 000），分装于无菌试管内,每管约4 mL,立刻用无菌橡皮塞塞紧,放在4 ℃冰箱内,至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。 A.10 氰化钾 （KCN） 培养基 将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1 环接种于氰化钾（KCN）培养基。并另挑取1 环接种于对照培养基。在36 ℃±1 ℃培养1 d～2 d，观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2 d 细菌不生长为阴性（抑制）。 注:氰化钾是剧毒药,使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。 试验方法 蛋白胨 5.0 g，酵母浸膏 3.0 g，葡萄糖 1.0 g，蒸馏水 1 000 mL，1.6％溴甲酚紫-乙醇溶液 1.0 mL L-赖氨酸或DL-赖氨酸 0.5 g/100 mL 或1.0 g/100 mL pH 6.8±0.2 除赖氨酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100 mL，分别加入赖氨酸。L-赖氨酸按0.5％加入，DL-赖氨酸按1％加入。调节pH。对照培养基不加赖氨酸。分装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡，115 ℃高压灭菌10 min。 A.11 赖氨酸脱羧酶试验培养基 从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。 试验方法 牛肉膏 5.0 g，蛋白胨 10.0 g，氯化钠 3.0 g，磷酸氢二钠（含12 个结晶水） 2.0 g，0.2％溴麝香草酚蓝溶液 12.0 mL 蒸馏水 1 000 mL，pH 7.4±0.2 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节pH。按0.5％加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121 ℃高压灭菌15 min。 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100 mL，121 ℃高压灭菌15 min。另将各种糖类分别配好10％溶液，同时高压灭菌。将5 mL 糖溶液加入于100 mL 培养基内，以无菌操作 分装小试管。 注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。 A.12 糖发酵管 从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36 ℃±1 ℃培养,一般2 d～3 d。迟缓反应需观察14 d～30 d。 试验方法 A.13 ONPG 培养基 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）60.0 mg 0.01mol/L 磷酸钠缓冲液（pH7.5） 10.0 mL 1％蛋白胨水（pH7.5） 30.0 mL 将ONPG 溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，用橡皮塞塞紧。 试验方法 自琼脂斜面上挑取培养物1 满环接种于36 ℃±1 ℃培养1 h～3 h 和24 h 观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生，则于1 h～3 h 变黄色，如无此酶则24 h 不变色。 牛肉膏 0.3 g,蛋白胨 1.0 g，氯化钠 0.5 g，琼脂 0.35g～0.4 g 蒸馏水 100 mL，pH 7.4±0.2 按以上成分配好,煮沸溶解,调节pH。分装小试管。121 ℃高压灭菌15 min。直立凝固备用。 注:供动力观察、菌种保存、H 抗原位相变异试验等用。 A.14 半固体琼脂 用新鲜的琼脂培养物接种，于36 ℃±1 ℃培养48 h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。