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Enzyme 2 淀粉酶活性之测定还原糖(ex葡萄糖`果糖).ppt
Enzyme 2 :澱粉酶活性之測定 Enzyme 2 :澱粉酶最適pH之測定 * 還原糖 (ex:葡萄糖、果糖) 本氏液 (Benedict’s solution) Benedict’s solution內含之Cu2+ 會被還原糖的官能基還原形成Cu2O之紅色沉澱 顏色變化： 藍 → 藍綠 → 綠 → 褐 → 橙 → 紅 (Cu2O) 還原糖之多寡： 少——————————————→ 寡 原理 ＋ △ a b c 各加入1 ml 3%澱粉液 a:加入1 ml 3% α-amylase b:加入1 ml新鮮唾液 c:加入1 ml ddH2O 放置加熱器反應37℃ 30 min a、b、c 3個試管各加入10滴的本氏液 置於水浴加熱並觀察各管顏色之變化 步驟 結果 問題 實驗觀察結果 澱粉結構與種類 澱粉酶種類 藉由在不同的pH值的條件下，利用還原糖的測定(DNS呈色法)，在A540nm測吸光值，進而得知酵素最適pH值。 原理 澱粉 α-amylase 葡萄糖、麥芽糖、異麥芽糖 及6~9個葡萄糖組成的寡糖 可切斷澱粉中 α-1,4糖苷鍵 步驟 再將各管分別加入100 μl DNS reagent，沸水浴5 min 測OD540下吸光值 1%澱粉：將1 g澱粉溶於100 ml ddH2O，加熱100℃至澱粉糊化 先各加入500 μl 1% 澱粉液 200 μl 100 mM磷酸緩衝液(pH=5,6,7,8,9)以及ddH2O 再加入100 μl 1% NaCl a b c d e f 取6支試管 將各試管放置37℃下，保溫5 min a~e管加入100 μl 1% α-amylase；f 管100 μl ddH2O 37℃下反應30 min 結果 問題 澱粉酶之最適pH 酵素與基質有哪些關係 *
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