抗帕金森病新药发现评价.pdf

抗帕金森病新药的发现与评价 摘要 帕金森病是一种锥体外系功能障碍引起的慢性神经退行性疾病，病理特征是脑 黑质致密体部位多巴胺能神经元变性，纹状体内多巴胺递质含量显著减少，导致黑 质纹状体多巴胺能神经功能低下而胆碱能神经功能相对占优势，从而产生运动障 碍。帕金森氏病在60岁以上的人群中的发病率高达1％。导致多巴胺神经元变性的原 因迄今不明，目前认为，遗传、感染、免疫功能异常、衰老、体内外的神经毒素等 因素对帕金森氏病发病均起一定的作用，而氧化应激和线粒体功能受损在帕金森氏 病的发病中有十分重要的作用。 目前已有的抗帕金森病药物只起改善症状的作用，不能延缓疾病的进程，不能 预防多巴胺能神经元的退变，且长期应用有严重的毒副作用，而且可能恶化疾病， 因此急需有效的治疗药物。近年来，帕金森氏病药物治疗由直接补充多巴胺转向多 环节治疗，重点集中于对多巴胺能神经元的保护作用。 第一章：抗帕金森病新药筛选 根据帕金森病的发病原因和病理机制，本实验建立了氧化应激相关的6．oHDA 损伤SH—sY5Y细胞保护模型和类神经生长因子的小分子活性化合物的筛选模型，这 两个模型分别从不同的作用机制来反应药物的作用。6一oHDA是一种选择性损伤多 巴胺能神经元的毒素，此模型可以特异性的筛选出对多巴胺能神经元有保护作用的 药物。神经生长因子是目前帕金森病最有效的神经保护治疗剂，但由于其蛋白质性 质，限制了临床应用，此模型可以特异性的筛选出类NGF的小分子化合物。通过对 560个黄酮类天然产物的筛选，结果发现了三个同时具有较强的抗6一OHDA损伤和促 Pcl2细胞分化作用的化合物。本实验选取在这两个模型中活性均最强的化合物 DL0705进行下一步的研究。进一步细胞实验结果显示，化合物DL0705能剂量依赖 能剂量依赖性的减轻6．OHDA致PCI2细胞损伤的作用，并有明显的促进正常和 6一OHDA损伤情况下PCI2细胞分化和轴突生长的作用。 芩的干燥根中提取的有效成分之一，具有多种药理作用，如：抗菌、抗病毒、抗炎、 抗变态反应、抗氧化、清除氧自由基、抗肿瘤、抗凝、抗血栓形成和保护肝脏、心 脑血管、神经元等作用。最近的研究报道黄芩素可以预防AB诱导的皮层神经元的损 伤，可以预防6一OHDA和LPs诱导的多巴胺能神经元的损伤。这些研究结果提示黄 芩素可能是一个有效的治疗神经退行性疾病的化合物，为了探讨DL0705在帕金森病 中的应用前景，本研究进一步采用三种不同的帕金森病动物模型，从动物行为学、 脑内神经递质含量、多巴胺能神经元数目、氧化损伤等方面，对DL0705作为神经元 保护药物用于抗实验性帕金森病的作用及机制进行探讨。 第二章：DL0705对小鼠MPTP帕金森病模型的作用及机制研究 本章采用C57BL／6小鼠腹腔注射MPTP建立亚急性帕金森病动物模型，通过检测 小鼠的行为学特征，黑质中多巴胺能神经元数目和纹状体中的单胺类递质的变化来 评价DL0705对帕金森病小鼠的影响，同时通过检测氨基酸类神经递质，MPTP损伤 酰胆碱酯酶(AcIlE)和氧化应激等多种相关指标来探讨DL0705可能的作用机制。 体数目增加20％左右；DL0705可抑制炎症反应，如显著抑制星形胶质细胞反应性增 活性的趋势，从而起到保护多巴胺能神经元的作用。比较DL0705和美多芭在此模型 产生影响，而且对5一HT和。肾上腺素类递质也产生影响；除此之外，DL0705的抗氧 化作用也在帕金森病中起了重要的作用。 第三章：DL0705对6．oHDA偏侧损伤致帕金森病大鼠模型的作用及机制研究 本章采用6．OHDA前脑内侧束两点定位注射法建立偏侧帕金森病大鼠模型，造 模后2周，通过检测阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为，选取旋转圈数≥240转／40min的 大鼠作为造模成功的大鼠。然后随机分组进行药物治疗，分别在给药后l周、2周和 3周检测大鼠的旋转行为，在给药3周后同时进行自发活动和肌电测定，通过单胺类 递质的变化和多巴胺能神经元数目多少来评价DL0705在体内的活性和药效。然后 通过检测氨基酸类递质含量，多巴胺转运体(DAT)，胶质源性纤维蛋白(GFAP)，单 DL0705可能作用的机制。 结果显示，造模两周后，绝大多数大鼠出现了阿朴吗啡诱导的旋转行为，但只 有60％的动物模型成功(≥240r／40min)。而DL0705给药3周并未降低阿朴吗啡诱导的 DL0705可显著改善帕金森病大鼠的肌电活动，降低震颤的频率和幅度(P<O．01)。