应用荧光原位杂交技术进行甲型血友病胚胎植入前诊断.pdfVIP

应用荧光原位杂交技术进行 甲型血友病胚胎植入前诊断 任红赵海波张建芳燕凤 第四军医大学西京医院妇产科，全军计划生育优生优育技术研究所 中国人民解放军西京医院生殖医学中心；陕西西安710032 甲型血友病是x染色体连锁隐性遗传性出血性疾病，目前临床上对该疾病尚无根治办法。胚胎 Genetic Diagnosis，PGD)，可选择正常胚胎进行移植，有效地防 植人前遗传学诊断(Preimplantation insitu 止甲型血友病患者的出生。我们应用荧光原位杂交(Fluorescence 胎进行PGD。现报道如下。 一、资料与方法 1．病例介绍：患者35岁．已婚10年，为甲型血友病携带者。 2．方法：(1)胚胎及活组织细胞检查(活检)固定：采用本中心常规超排卵、取卵及体外受精方案， 取卵后第3天观察胚胎并活检活检的方法参考文献。(2)探针：选用美国Vysis公司的染色体特异探 针(蓝、绿色标记)。在71xL杂交缓冲液内分别加l此LSI探针。(3)外周血淋巴细胞对照：用正常男 性5rain②探针在73℃变性5rain。③在标本上加探针，加盖玻片，封口。④73℃杂交4h。⑤去盖玻 4×SSC／NonidetP 片后，将玻片置于73℃、0．4x氯化钠／柠檬酸钠缓冲液／03％乙基苯基聚乙二醇(0 x 一40)中2min，室温下2SSC／0．1％NP一40中lmin洗脱并行非特异性杂交。⑥二眯苯基吲哚复 染．⑦荧光镜下观察结果。(5)胚胎移植：选择有正常信号的胚胎进行移植，剩余胚胎均经固定后进行 FISH分析。 二、结果 患者共获卵12个，正常受精lO个，9个胚胎发育良好。胚胎在第3天发育至8细胞期，行胚胎活 检。FISH结果显示，2个胚胎正常，其他胚胎FISH分析异常，移植了2个正常胚胎。胚胎移植后14 d．尿人缄毛膜促性腺激素(hCG)(+)，孕7周B超检查见胎心搏动。 三、讨论 PGD使选择胚胎进行移植成为可能。这项技术可用于有遗传缺陷的患者，避免了缺陷患儿的出 生，减少了患者的痛苦。自1990年报道第一例植人前性别诊断婴儿的出生后．该项技术已用于X连 锁隐性遗传疾病、单基因遗传病、非整倍体的植入前诊断等。用胚胎活检获得的单细胞行FISH分析 方法较简单，而且适用于男女双方的遗传缺陷。 由于该病为X染色体连锁隐性遗传，故通常女性为携带者，男性患病。我中心采用甲型血友病的 家系的检测后，对胚胎进行活检选择，在PGD中胚胎活检时取2个卵裂球，在2个卵裂球均正常的情 况下，进行移植，可以减少误诊的发生率。对携带者的胚胎进行植入前诊断则避免甲型血友病患儿的 出生。 ．-——380．--——