现代生物制药工艺学（第二版）第十一章.ppt

11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 (2)生产工艺 工艺流程 粗制 精制 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ②工艺过程及控制要点 提取 碱化、酸化 减压浓缩 去脂、盐析 精制 结晶 回收 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （3）质量检验 原料质量控制 生产过程质量控制 产品性状 产品纯度要求 胰岛素效价测定 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （4）胰岛素制剂 （5）酶促半合成人胰岛素 （6）重组DNA技术制造人胰岛素 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 4.生长素 （1）结构和性质 人的生长激素是由一条191个氨基酸的多肽链所构成的蛋白质，分子中有两个二硫键，相对分子质量21700，等电点4.9（猪为6.3），沉降系数S20，W 2.79。用糜蛋白酶或胰蛋白酶处理生长激素使部分水解，活性并不丧失，可见生长激素的活性并不需要整个分子。 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （2）生产工艺 ①工艺流程 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ②工艺过程 原料处理 提取 分级沉淀 透析 等电点沉淀 盐析 凝胶过滤 DEAEC（DE-50）层析 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （3）人生长激素（hGH）的研制 （4）效价检验 GH生物测定用鸽子嗉囊法及大白鼠尾骨法 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 5.白细胞介素-2和白细胞介素 （1）IL-2结构与性质 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （2）IL-2的传统制备工艺 ①工艺流程 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ②工艺过程及控制要点 诱生 病毒灭活和固液分离 硫酸铵分级沉淀 除盐 蓝色琼脂糖层析 凝胶层析 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （3）质量检验 取小鼠脾淋巴细胞经ConA及rIL-2（或20%大鼠因子）处理后得IL-2的靶细胞（CTC）。测定时，将靶细胞配成1×106个/mL，取100μL加到96孔细胞培养板中，再加入100μL不同稀释度的样品，置CO2培养箱（37℃）培养24h，于结束前6h每孔加入0.5μCi（1Ci=37GBq）3HTdR。培养结束后，收集细胞，检测掺入细胞的同位素量，同时做标准对照。通过比较待测样品和已标定活性单位的标准品IL.2两者之间CTC的增殖能力来确定活性单位。 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 (4)基因工程IL-2的制备 IL-2基因结构 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ②IL-2cDNA克隆的制备 ③IL-2的表达和纯化 11.3 蛋白质类药物的制备 主要蛋白质类药物的制备 2 蛋白质类药物 1 11.3.1 蛋白质类药物 蛋白质类激素 血浆蛋白 蛋白质类细胞生长调节因子 黏蛋白 胶原蛋白 碱性蛋白 蛋白酶抑制 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 1.白蛋白及人血丙种球蛋白 （1）结构和性质 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 （2）白蛋白及人丙种球蛋白的生产工艺 工艺流程 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ②白蛋白制备工艺过程及控制要点 络合 解离 分离 超滤 热处理 澄清和除菌 分装 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ③人血丙种球蛋白制备工艺及控制要点 取利凡诺pH=8.6沉淀后的上清部分，在不锈钢反应罐中开启搅拌器，并以1mol/L盐酸调pH=7.0，加23%结晶硫酸铵，充分搅拌后沉淀静置4h以上。 虹吸上清液，将下部混悬液泵入篮式离心机中离心，得沉淀。 将沉淀用适量无热原蒸馏水稀释溶解，在不锈钢压滤机中进行澄清过滤。 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 以SartoconⅣ超滤器浓缩、除盐。⑤ 浓缩液在除菌后，静置于2～6℃冷库中存放1个月以上。 以不锈钢压滤器澄清过滤，再通过Sartolis冷灭菌系统除菌。 丙种球蛋白含量及全项检查合格后，灌封机分装，即得人血丙种球蛋白成品。本品内含适宜的防腐剂。有蛋白含量5%与10%两种规格。 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 (3)质量检验 ①白蛋白的质量检验 性状：本品为淡黄色略带黏稠状的澄明液体或白色疏松物体（冻干品），pH=6.6～7.2 溶解时间：本品冻干制剂配成10%蛋白含量时，其溶解时间不得超过15min。 水分：冻干制剂水分含量不超过1%。 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 白蛋白含量：应不低于本品规格。 纯度：白蛋白含量应占蛋白含量的95%以上；残余硫酸铵含量应不超过0.01%（g/mL）；无菌试验、安全试验、毒性试验、热原试验均应符合卫生部白蛋白制造及检定规程的规定。 11.3.2 主要蛋白质类药物的制备 ②人血丙种球蛋白的质量检验 本品为无色或淡褐色的澄明液体，微带乳光但不应含有异物或摇不散的沉淀，pH=6.6～7.4。 含量：制品中丙种球蛋白含量应占