现代生物制药工艺学（第二版）第十八章.ppt

18.4.7 基因工程干扰素的生产制造 5.基因工程干扰素半成品及成品质量控制 基因工程干扰素半成品及成品质量检测还要做无菌试验、鉴别试验、异常毒力试验、热原试验、干扰素效价试验及水分、pH值、外观等项检测。基因工程干扰素不是国家批签发制品，只要生产企业质检部门按国家标准检定合格，即可出厂销售使用。 18.4.8 抗ABO血型系统血清诊断试剂的制备工艺 1.人源抗ABO血型系统血清的制备 (1)血液的采集 (2)吸收冷凝集素 (3)分离血清 (4)灭活 (5)染色 (6)除菌过滤 (7)分装及冻干 18.4.8 抗ABO血型系统血清诊断试剂的制备工艺 2.动物来源抗ABO血型系统血清的制备 18.4.8 抗ABO血型系统血清诊断试剂的制备工艺 3.单克隆抗体的应用 杂交瘤技术的发展，使复杂的抗原物质不需要经过高度纯化步骤，即可得到能分泌各种针对特定抗原决定簇的抗体的细胞系。首先构建抗A血型或抗B血型杂交瘤细胞，经培养传代，检测血凝效价合格后扩大培养。将杂交瘤细胞接种小鼠腹腔，数周后取小鼠腹水，离心去沉淀，除去纤维蛋白原，加入防腐剂，冻存于-30℃。合并杂交瘤细胞培养上清液，最后加入相应的染料，除菌过滤即得。 18.4.8 抗ABO血型系统血清诊断试剂的制备工艺 4.ABO血型定型试剂的质量要求 物理性状 ②效价试验及亲和力试验 18.4.8 抗ABO血型系统血清诊断试剂的制备工艺 ③特异性 18.5 单克隆抗体生产工艺 鼠源单克隆抗体制备 2 HBsAg 单克隆抗体的制备工艺 3 抗体概述 1 18.5.1 抗体概述 1.抗体 2.抗体的结构 18.5.1 抗体概述 18.5.1 抗体概述 3.抗体的分类 第一代抗体为多克隆抗体(polyclonal antibody)，系由早期传统的方法制备的抗体，把天然抗原经各种途径免疫动物，分离提取的免疫血清。 第二代抗体主要形式有两种：全抗体和酶解片段抗体。 第三代抗体是指用基因工程方法，对抗体的基因进行重组、缺失、修饰改型等，构建载体，在受体细胞中表达，获得的抗体。 18.5.2 鼠源单克隆抗体制备 1.杂交瘤细胞系的制备 （1）制备B淋巴细胞 （2）原生质体融合 （3）杂交瘤筛选与克隆化 18.5.2 鼠源单克隆抗体制备 2.杂交瘤细胞的培养 3.单克隆抗体的分离纯化 （1）离心 （2）沉淀 （3）纯化 18.5.3 HBsAg 单克隆抗体的制备工艺 1.工艺流程 18.5.3 HBsAg 单克隆抗体的制备工艺 2.工艺过程及控制要点 （1）培养基 （2）饲养细胞制备 （3）亲本细胞准备 （4）固定化抗大鼠K轻链单抗的制备 （5）细胞融合 （6）杂交瘤细胞筛选 （7）抗HBsAg单克隆抗体的生产 （8）抗HBsAg单抗的分离纯化 18.3.1 病毒类疫苗的生产工艺 2.病毒的繁殖 (1)活体动物培养 (2)鸡胚培养 (3)细胞培养 ①常用的维持液和生长液 ②培养条件的控制 18.3.1 病毒类疫苗的生产工艺 3.疫苗的灭活 不同的疫苗，其灭活的方法不同，有的用甲醛溶液(如乙型脑炎疫苗、脊髓灰质炎灭活疫苗和斑疹伤寒疫苗等)，有的则用酚溶液(狂犬疫苗)。 所用灭活剂浓度则与疫苗中所含的动物组织量有关。 灭活温度和时间，需视病毒的生物学性质和热稳定性质而定。 18.3.1 病毒类疫苗的生产工艺 4.疫苗的纯化 疫苗纯化的目的，是去除存在的动物组织，降低疫苗接种后可能引起的不良反应。用细胞培养所获得的疫苗，动物组织量少，一般不需特殊的纯化，但在细胞培养的过程中，需用换液的方法除去培养基中的牛血清；用动物组织所制成的疫苗，可经过乙醚纯化，或经透析、浓缩，或用超速离心提纯，亦可用三氯醋酸提取抗原。这些方法的工艺均较复杂，且不能达到完全消除不良反应的目的，故这种疫苗已被细胞培养的疫苗取代。 18.3.1 病毒类疫苗的生产工艺 5.冻干 冻干的要点是：先将疫苗冷冻至共熔点以下，在真空状态下将水分直接由固态升华为气态，然后缓慢升温，不使疫苗在任何时间下有融解情况发生，直至完全干燥，冻干的疫苗在真空或充氮后密封保存，使其残余水分保持3%以下。这样的疫苗将能保持良好的稳定性。 18.3.2 细菌类疫苗和类毒素的一般制造方法 18.3.2 细菌类疫苗和类毒素的一般制造方法 1.菌种的选择 （1）菌种必需持有特定的抗原性，能使机体诱发特定的免疫力，阻止有关病原体的入侵或防止机体发生相应的疾病 （2）菌种应具有典型的形态、培养特性和生化特性，并在传代的过程中，能长期保持这些特性。 （3）菌种应易于在人工培养基上培养。 （4）如系制备死菌苗，菌种在培养过程中应产生较小的毒性。 （5）如系制备毒素，则菌种在培养过程中应能产生大量的典型毒素。 18.3.2 细菌类疫苗和类毒素的一般制造方法 2.培